仪器名称：荧光定量PCR仪
生产厂家：美国ABI公司
产品型号：ABIStepOne
仪器编号：20113937
主要性能参数：
支持反应体积 | 10-30μL |
样本升温速率 | 快速模式：+/-2.2℃/秒 标准模式：+/-1.6℃/秒 |
熔解曲线分辨率 | 低至0.1℃ |
装机时已校准染料 | FAMTM，SYBR GreenⅠ，VIC，JOETM， ROXTM染料 |
被动参照染料 | ROXTM染料 |
数据采集 | 无论样品板如何设置，系统会对每个反应孔采集每种滤光片的信号，运行结束后反应板的设置可修改 |
定量PCR运行时间 | 快速模式：小于40分钟 标准模式：小于2小时 |
主要应用范围：
StepOne系统支持任何实时PCR的应用。目前已有以下这些预先设计好的或是用户设计的实验方案：基因表达分析,SNP（单核苷酸多态性）基因分型,MicroRNA表达分析,染色体易位分析,病毒载量分析,基因检测
样品处理要求：请混好反应液后再来上机
使用注意事项：
1.该仪器为48孔型号的，支持反应体积10-30uL，支持ABI公司的以下耗材：
1）48孔（0.1mL）反应板及光学盖膜
2）48孔（0.1mL）反应板及光学平盖
3）8连管（0.1mL）及光学平盖
4）单管（0.1mL）及光学平盖
亦可选用其他公司的同类产品，但订购时请向销售人员确认是否可用于该型号的仪器，或者先拿几个来试用下，另外请一定注意，要购买0.1mL的！
2.请按顺序打开电源——PCR仪——电脑，实验结束后反向顺序依次关闭。
3.校内人员请混好反应液后再来上机，校外人员可来此操作，但请自备试剂和耗材（管子和枪头）。
4.预约后请联系管理员告知其使用时间，请尽量选择上班时间，首次使用请仔细阅读操作流程和需自备物品，有疑问可联系管理员。
5.该仪器运行标准程序耗时约2小时，若需做熔解曲线（MeltingCurve）则需要2.5小时，开机准备约需15分钟，故请预约足够时间，并提前来上机，勿超时占用他人时间。
6.勿使用自带U盘，专用U盘拷取数据后请及时格式化并送回。
7.请严格按照操作流程操作，使用完毕请做好登记，并整理好仪器和台面，丢掉垃圾。若实验过程有何问题请及时联系管理员。
常见问题：
无CT值（信号）出现 | 反应循环数不够。可根据实验情况增加循环 |
模板量不足或模板降解。可减少模板的稀释倍数，并注意样品不要反复冻融 |
引物设计不佳。可重新设计引物 |
染料问题。可更换另一批次或另一品牌的染料 |
CT值出现过晚 | 扩增效率低，反应条件不够优化。设计更好的引物；改用三步法进行反应；适当降低退火温度等 |
PCR产物太长。可采用100-200bp的产物长度 |
熔解曲线不止一个主峰 | 引物设计不够优化。应避免引物二聚体和发夹结构的出现 |
引物浓度不佳。适当降低引物的浓度，并注意上下游引物的浓度配比 |
模板有基因组的污染。RNA提取过程中避免DNA的引入，或通过引物设计避免非特异扩增 |
实验重复性不好 | 加样不准确 |
仪器在样品上温度条件有差异，即温度均一性不好 |
模板浓度低。样品初始浓度越低，重复性越差，应减少样品的稀释倍数 |
须自备的试剂及耗材：
1.Realtime PCR试剂（SYBR Green等染料），PCR H2O，引物等。
2.48孔反应板，单管或8连管及配套平盖，均为0.1mL规格。
3.若为外校人员来此操作，还需自备所需移液枪枪头。
